实验四 葡萄球菌和链球菌
扬州大学兽医学院 成大荣
一,目的要求
1. 掌握金黄色葡萄球菌和链球菌的形态与染色特点; 2. 熟悉致病性葡萄球菌和链球菌的微生物学诊断法; 3. 学习凝固酶试验,过氧化物酶试验的操作方法.
二,背景知识介绍
1. 葡萄球菌
G+ 排列为葡萄串状
① 金黄色葡萄球菌是这个菌群的重要成原; ② 与广泛的临床病征有关,如: 脓肿,乳房炎,羔羊脓毒血症,食物中毒 等; ③ 最常用的鉴定项目:凝固酶,DNA酶产生或甘露醇发酵.
个体为球状
2. 链球菌
G+
个体为球状
排列为链状
① 根据细胞壁多糖抗原,链球菌可分20个抗原群; [A—H,K—V] ② 大多数动物致病的链球菌在A~E和G群; ③ 由链球菌引起的疾病: 乳房炎,宫颈炎,子宫炎,流产, 腺疫,创伤感染以及生殖道感染. ④ 近年来,人兽共患的猪链球菌病: 猪链球菌2型属于R群,猪链球菌1型属于S群
三,实验材料
1. 2. 3. 常规接种工具:接种棒,酒精灯等 革兰氏染色液 菌种: 葡萄球菌的普通琼脂平板培养物(2个/组) 葡萄球菌的肉汤培养物(0.6mL/组) 无乳链球菌的血琼脂平板培养物(2个/组) 链球菌的血清肉汤培养物(2mL/组) 培养基: 甘露醇盐琼脂平板(1个/人),血琼脂平板(2个/人) 兔血浆(2mL/组) 3%H2O2 1瓶(新配,20mL/组) 玻片,滴管 等
4. 5. 6. 7.
四,实验内容
1. 观察
金黄色葡萄球菌在普通琼脂上的生长表现; 观察无乳链球菌在血琼脂上的生长表现; 葡萄球菌与链球菌的革兰氏染色,镜检; 记录结果. 平板 肉汤
2. 移植划线培养
① 金黄色葡萄球菌 在血琼脂上分3~4区划线; 在甘露醇盐琼脂上分2~3区划线; ② 无乳链球菌CAMP试验 在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌划一条线; 然后用每种无乳链球菌划一条线与金黄色葡萄球菌的 线相互垂直,但不要接触. ③ 置 37℃培养.
3. 接触酶试验
接触酶又称为过氧化氢酶,以正铁血红素作为辅基,能将 过氧化氢分解为水和氧. 一般需氧细菌与兼性厌氧细菌(除某些链球菌,乳酸杆菌 等外)能产生接触酶,而厌氧细菌不产生接触酶,这是区 别需氧和厌氧菌的方法之一.
方法1
金黄色葡萄球菌
方法2
3%H2O2
4. 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验
① 取金黄色葡萄球菌肉汤培养物0.6mL同1mL兔血浆于 试管内充分混合,置 37℃培养; ② 定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h. 阳性:内容物完全凝固,试管倒置或倾斜时不流动
五,结果观察
1. 葡萄球菌生长表现
普通琼脂:光滑,湿润,隆起的边缘 整齐,不透明的圆形菌落,直径1~2mm. 血琼脂:形成较大的菌落,β溶血.
甘露醇盐琼脂平板:分解甘露醇,抵抗高浓度NaCl.
2. 链球菌生长表现
无乳链球菌:细小或露滴状,灰白色,圆而微凸,表面光滑, 边缘整齐的菌落,直径0.5~0.75mm,不溶血. CAMP试验:在有金黄色葡萄球菌产物存在的情况下,无乳 链球菌可产生明显的溶血现象.
3. 细菌的染色,镜检
4. 接触酶试验 葡萄球菌:阳性 链球菌:阴性
5. 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验
阳性:内容物完全凝固,试管倒置或倾斜时不流动
六,思考题
1. 葡萄球菌与链球菌形态与染色特点 2. 葡萄球菌与链球菌培养特性 3. CAMP试验的操作和用途