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    !" 卷"期#$$" 年%$ 月微生物学报 &'()!" *+,'-./ 0')" ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! #$$" " 通讯作者.1.(: 234#"42!56"5#2; 789: 234#"42!56""#5; :4;8<(: =>(,"]4\K\SSK1\\KSKS111SK1 ( \^1) ( K^\) 1SS\1\KS45]; 和%"%$/, "]4 S1SKKS\11K\SS (\^1) 1K\\11S11K\SK\1145] [%] .反应体系 ("$ # O) : 缓冲 液"#O, %$;;'(^O M01W $D " # O, #";;'(^O Y@\O# " # O, :_ 849 J0K 聚合酶 %D#" # O, % U %$?@^;O 模板 % # O, %$ # ;'(^O 上、 下游引物各%#O.反应条件: 6!X ";& 软件中的 5?@5>AB, 对所有来源于 虎粪的序列与部分 6789:8; 中的最相似序列比较, 绘制进化系统进化树. * 结果 *"! 虎粪细菌 序列分析 C2 个克隆经 &'( 检测后, 获得 "#D 个阳性克 隆.经过限制性酶切分析, 筛选出 ") 个不同 的"*A %(?@基因序列; 其序列通过 9.@AB 分析,") 个 序列中有 "- 个序列与梭菌属成员有 C/3以上的同 源性, 其中有 * 个序列在 "/1D 个碱基范围内与诺维 梭菌有 CC3 的同源性, 鉴定为诺维梭菌的不同型. "E#、 24""、 24"2 与29* 在"#C2 范围内比对的结果都 与猪粪细菌 (BF"D9 有C13的相似性.其他序列与 6789:8; 中的序列同源性低于 C13, 属于未培养细 菌.其中, 序列 "5# 与肉杆菌 GHI) (F121C 株有 C/3的同源性 (表") . 表!虎 粪细菌的 的相似性比较结果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系统发育分析 虎粪细菌测序克隆分布于梭菌属的 * 个类群 中, 包括 # 个梭菌的类群、 芽孢杆菌F乳酸杆菌F链球 菌类群、 消化链球菌类群、 产丁酸菌类群 (图") . 9.@AB 分析显示, 24 )、 "E / 虽在序列的相似性 上分别与 '5#2+)%6%-. 9(2"-% 及破伤风梭菌 EDD 有较 高的相似性, 但在进化树中, 两克隆在 12D 个碱基范 围内两序列间相似性较高. "E2 在进化关系上同产气荚膜梭菌相近, 与9.@AB 结果一致."5# 与肉杆菌 (F121C 株有 C/3 的同源性, 在进化关系上, 主要与低 6 X ' 革兰氏阳 性菌 !)" 及巨大芽胞杆菌(;("%55-2 .,1( !Y#- 株亲缘关系相近. 2'"2 在"/-- 个碱基范围内与梭菌 "/)-) 有C)3 的同源性, 在进化关系上与肉毒梭菌4型E;KT8, 2-24 及氧化还原真杆菌( #<%6#),6-",&2) 62F2 株亲缘关系相近. 来自白虎粪的克隆 #6 C 测序结果与进化关系 上都与多形链球菌相近. 2 1 * 微生物学报 3"5#1%2--),ZPKI/) ?PI) 图!虎粪细菌测序克隆与 "#$%&$' 中最相似序列的同源关系 0'*1",# /+)2-"*,0'"30 4+-1+5 %67 /89: 0+;<+,.+0 -'2- 1+7"4+/"2,0 2,5 -'+ .)*0+0- /+)2-"?+0 ", @+,A2,B ( 讨论 虎粪细菌区系的组成如何, 至今未见报道.本 研究对虎粪细菌区系组成进行了初步探讨,结果显 示虎粪细菌区系的主要组成为梭菌属的成员, 均属 于低(@ C D) 含量的厌氧细菌.与草食动物及杂食 动物相比, 虎粪细菌区系简单, 与其肠道结构特点相 关.虎的肠道长度通常在 6 E F 米范围内, 体长G肠 长比仅为 %HI [F] .消化道的空间大小及食物在消化 道内转移的时间, 是制约微生物生长繁殖的重要因素, 可能是导致区系中细菌组成贫乏的主要原因之一. 现代细菌学倾向于细菌的基因型特征结合表型 特征进行分类, 公认的方法是依据细菌 %67 /J9: 序 列进行分类.目前建议的标准是, KKL E %MML全序 列相似性的细菌, 判定为同一个种, KNL E KKL相似 者, 定为同一个属 [K, %M] .根据上述标准, 虎粪中存在 诺维梭菌、 消化链球菌属成员等优势菌. 梭菌属的细菌是很多动物的肠道及粪样微生物 区系中的优势菌, 在虎粪中是最主要的优势菌.猪 肠道和粪样中还有瘤胃球菌、 真杆菌等优势菌.这 些优势菌的相互关系如何, 值得进一步研究. 虎粪中 I 个与猪粪细菌 JOP%FA 有KNL同源性 的克隆, 在分类上属于消化链球菌属.Q'"-+'+25 等[%%] 指出, 这类细菌广泛存在于自然界, 并呈全球 范围分布 [%R] .在牛的瘤胃中少量存在, 却可大量产 氨, 其在虎消化道中扮演的角色如何, 尚不清楚. 参考文献[%]:>2,, J S,T<51"# Q,7.U V$5+,-"=".2-"*, 2,5 !" #!$% 5+5"?"5<2) >"./*4"2) .+))0 1"2-"*,$ KKW,)*: %IX Y %6KZ [ R ] &2.+ 9 J,7-2') 8 :,T2,+ 8 O'+ 2,2)(0"0 *= ,2-"./*4"2) 3*3<)2-"*,0 4( /"4*0*>2) J9: 0+;<+,.+0$ ./& 0,1#, %KFW,)!: I Y %RZ [ X ] O2\">2 U,:>",*? J S,92#+>",+ O,J<>+, 42.-+/"2) 5"?+/0"-( 20 5+-+/>",+5 4( 0+;<+,.+ 2,2)(0"0 *= %67 /89: )"4/2/"+0$ 23&45 3')+)45,%KKK,+*: %WK Y %6KZ [ I ] 7#'"/ :,8*/] [,^2.B"+ J S$2/ 5"?+/0"-( 2,5 3' '<>2,42.-+/"2$ S,:A+)) D J,2/ @20-/*",-+0-",2) 7(0-+>0 ^"./*4"2) A"*0(0-+>0: 9+1 !/*,-"+/0 &/*.++5",#0 *= -'+ F-' S,-+/,2-"*,2) 7(>3*0"4"2) 5$ V2)"=2': :-)2,-". D2,252 7*4"2) KKKZ X N 6 RMMW,a*)$IW 9*$W 图 雅等: 东北虎粪细菌区系的 %67 /J9: 基因序列分析 00('1% 2 3, !" #$ 4 56678& #6 67917$&':07 8'9:#-;<9'&7% #$ =(>07& 6'78'0 :'8&79('0 8#11.$(&(7% '% 97)7'07< :; <7$'&.9($> >9'<(7$& >70 7078&9#=-#97%(% '$'0;%(% #6 ?@* 9(:#%#1'0 AB34 CDDE,!":CC! F CE!G [ @ ] *'1:9##H I, J9(&%8- 5 J, K'$('&(% L4 分子克隆实验指南4 金冬 雁, 黎孟枫, 等译 4第二版 4北京: 科学出版社, ?MM@G [ N ] O#07 I +,O-'( 2,K'9%- L,!" #$ 4 L-7 +(:#%#1'0 A'&':'%7 P9#Q78& (+APRSS) :=97)(7T($> ' $7T '.&#'0(>$79 &-'& '00#T% 97>.0'9 .=<'&7% '$< &-7 $7T =9#H'9;#&(8 &'U#$#1;4 ./*$!)* 0*)12 3!2,CDDE,"# (?) : VVC F VVE4 [ W ] 张淑云, 王东风 4 东北虎一些器官指数测定 4 野生动物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《微生物学报》 加入 "万方数据" 等数字化期刊群的声明 为适应我国信息化建设需要, 扩大作者学术交流渠道, 本刊已加入 《中国学术期刊 (光盘版) 》 和 "中国期刊网" .从CDDC 年 开始, 凡被本刊录用的文章均统一纳入 "万方数据— — —数字化期刊群" , 进入因特网提供信息服务.本刊所付稿酬包含刊物内 容上网服务报酬, 不再另付. 通常在期刊的出版过程中, 不可能将其中的一篇撤掉.因此, 本刊建议: 凡不同意转让光盘版和网络版的作者, 敬请改投 其他刊物. 读者可上网查询浏览本刊内容, 刊物网址: -&&=: aaT%TU:4 =79(#<(8'0%4 8#14 8$ 《微生物学报》 编辑部 V N @ 微生物学报 0*6)*# CDD!,b#04V! B#4!
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