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1.3 样品处理 首先将N-磷酰化肽酯及小肽配成0.4 mmolL 1甲醇溶液,氨基酸配成0.4 mmolL 1水溶液,将待 测物质各取20 L,加至400 L甲醇-水(体积比1 : 1)溶液内,混合均匀后进行质谱分析.
基金项目:国家自然科学基金(20572016,20672104,20772023) ,河南工程学院博士基金(D09004)资助 作者简介:强黎明(1974~) ,女,河南南阳人,博士,从事生物有机化学研究. E-mail: qianglm@yahoo.com.cn 通信作者:卢 奎(1963~) ,男,河南太康人,教授,从事生物有机化学研究.E-mail: luckyluke@haut.edu.cn
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2009 年 11 月
质谱学报
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2 结果与讨论
以上5种磷酰化肽酯及小肽与20种蛋白氨基酸相互作用的质谱分析结果显示: 含有芳香基团的磷 酰化肽酯及小肽与芳香性氨基酸的相互作用较强,其中与色氨酸(Trp)的作用最强;而含硫和羟基 氨基酸并没有像所预料的那样与磷酰化肽酯及小肽发生相互作用;在含有相同极性基团的天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸(Glu),天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)的分析中,只检测到了侧链稍长的 谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)与磷酰化肽的复合物;在3种碱性氨基酸中,赖氨酸(Lys)和精 氨酸(Arg)均与磷酰化肽有较强的相互作用,而侧链含有芳香环的组氨酸(His)却表现出与磷酰 化肽较弱的相互作用.
3 小结
所有这些结果表明:相互作用双方分子中的芳香环,极性基团是发生相互作用,形成复合物的 关键部位;另外,分子大小,柔顺性,空间位阻对形成复合物也有影响;而氨基酸的手性对它们的 相互作用在质谱上没有表现出影响.由此推断当蛋白与系列磷酰化肽酯及小肽发生相互作用形成复 合物时,蛋白中的芳香性,碱性,酸性和酰胺基氨基酸残基应是主要结合部位.这些结果将为蛋白 与系列磷酰化肽酯及小肽的相互作用研究提供实验基础和依据. 参考文献:
[1] 刘 勤, 张淑珍, 吴弼东, 等. 电喷雾质谱在超分子体系中非共价相互作用研究中的应用[J]. 质谱学报, 2005, 26(1): 51-58. [2] 袁金伟, 陈晓岚, 屈凌波, 等. ESI 质谱法对黄酮-7-磷酰化氨基酸酯与溶菌酶相互作用的研究[J]. 分析测试学报, 2009, 28(2): 135-139. [3] CAO S L, JIANG Y Y, FENG Y P, et al. Synthesis and biological activities of N-phosphoryl branched peptides[J]. Chin Chem Lett, 2003, 14(4): 343-346.
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3 结论
利用 CSI-MS 方法考察了溶剂表面张力对于蛋白质电荷价态分布是否产生影响这一关键问题. 本研究结果证明及支持了溶剂表面张力对蛋白质电荷价态分布不产生影响的观点.同时通过获得的 信息表明,在纯水溶剂以外的其他不同溶剂体系中,对于蛋白质的最大电荷价态分布,其雷利方程 的预测具有不合理性. 参考文献:
[1] SCHMELZEISEN-REDECKER G, BUTTERING L, ROLLGEN F W. Desolvation of ions and molecules in thermospray mass spectrometry[J]. Int J Mass Spectrom Ion Proc, 1989, 90: 139-147. [2] PESCHK M, BLADES A , KEBARLE P. Charged states of proteins. Reactions of doubly protonated alkyldiamines with NH3: solvation or deprotonation. Extension of two proton cases to multiply protonated globular proteins observed in the gas phase[J]. J Am Chem Soc, 2002, 124: 11 519-11 530. [3] DE LA MORA J F. Electrospray ionization of large multiply charged species proceeds via Dole's charged residue mechanism[J]. Anal Chim Acta, 2000, 406: 93-104. [4] IAVARONE A T, WILLIAMS E R. Mechanism of charging and supercharging molecules in electrospray ionization[J]. J Am Chem Soc, 2003, 125: 2 319-2 327. [5] AMALIKOVA M, GRANDORI R. Protein charge-state distributions in electrospray-ionization mass spectrometry Do not appear To be limited by the surface tension of the solvent[J]. J Am Chem Soc, 2003, 125: 13 352-13 353.

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