三,微生物检验
(一)标本直接检查
1.抗原检查
(1)免疫荧光技术:取病人唾液,尿沉
渣,角膜印片及皮肤切片(含毛束),
用荧光抗体染色检查狂犬病病毒抗
原.此法快速,敏感,特异性高.

(2)快速免疫酶联技术
取病人的脑组织,脑脊液,唾液腺,
唾液等标本检测狂犬病病毒核蛋白.
定量法是指标本光密度≥阴性对照
值+0.08为阳性.定性法为肉眼观
察阴性对照无色,检测标本出现黄
色为阳性.此法快速,敏感,阳性
率与荧光抗体检测法相近.
2.核酸检查
运用RT-PCR法检测标本中狂犬病病
毒RNA.此法敏感,快速,特异性高.
有条件的实验室可推广应用.
3.分离培养
取病人唾液,脑脊液或死后脑组
织接种动物,分离病毒,经中和试验
鉴定可确诊.但该法时间长,阳性率
低.
4.抗体检测
检测抗体可采用中和试验,补体结合试
验,血凝抑制试验,快速免疫荧光试验,
酶联免疫吸附试验等.国内多采用酶联
免疫吸附试验进行检测.将待检血清以
1:50稀释,其OD值达阴性对照OD值3倍
以上,即P/N ≥ 3为阳性.此法多用
于流行病学调查,也可用于确诊.但
感染者抗体在临床症状出现后才能测出.
5.捕捉动物观察
人被犬或其它动物咬伤后,检查动
物是否患有狂犬病,对采取防治措
施极为重要.一般不宜立即杀死,
应隔离观察710天,如不发病,则没
有患狂犬病.如发病,应取脑海马
回组织切片查内基氏小体.
三,微生物检验
1.核酸分析
原位滤膜杂交或点杂交.从细胞样
品中提取DNA,变性后用打点法吸附在
滤膜上,用同位素,酶或生物素标记
的特异性探针与滤膜上的病毒DNA杂交
后,用放射自显影或显色法检测杂交信
号.此法可检测到50个基因拷贝.
2.原位杂交
适用于经甲醛溶液固定过的组织
标本,每个细胞中含10-15个病毒
基因拷贝方可检测到.一般使用
共有序列或特异性探针.
3.DNA印迹
细胞DNA经限制性内切酶消化后,电泳分
离,变性,转移至尼龙膜上,在严谨条
件下与已知型别的标记病毒探针进行杂
交.一般在非严谨条件下,检测一个HPV
拷贝需10— 100个细胞.该法是最为可靠
的诊断方法.

4.聚合酶链式反应(PCR)
采用直接酶标引物扩增特异性DNA序
列,用探针杂交法检测扩增产物.
该法需样品少,速度快,特异性高.
第三节 细小病毒B19
与儿童镰刀细胞性贫血所致的造血障
碍,流行性红斑病,胎儿畸形及免疫
抑制病人的慢性感染,关节炎等有关.
呈小球形,无包膜的正或负链单链DNA
分子,直径约为26nm,有VP1及VP2两
种衣壳蛋白,后者壳总蛋白量的95%
左右.
微生物检验
检测病毒是诊断再生障碍性贫血的有效指
标.在病毒循环及排出结束后的数天,病
人出现红疹及关节痛,此时是检测细小病
毒B19IgM抗体最佳时间.可用ELISA测定.
以病毒基因中 2420～3091位核苷酸(1.4kb)
表达的融合蛋白为抗原,检测IgG及IgM抗
体,也用合成的VP2检测抗体.
检测病毒可用电子显微镜,对流免疫
电泳,RIA或EIA及核酸杂交等方法;
也可用原位杂交,PCR等技术检测组
织中的细小病毒B19的DNA.