附:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒方法
第一次使用前,在15ml漂洗液PW中加入60ml无水乙醇.
所有工作均在室温下进行.
操作步骤:
1.将目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管中,称取重量.
2.加入3倍体积溶胶液PN(如果凝胶重0.1g,其体积可视为100ul,加入300-500ul溶胶液),50℃水浴放置10分钟.期间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解(若胶块过大,请事先切碎).
3.试管恢复至室温.
4.加入10ul 3M NaAC,混匀,室温下10分钟.
5.将此溶液加入一个吸附柱,下置收集管,13000rpm离心30秒.倒掉收集管中的废液,将吸附柱再次插上收集管.
6.向吸附柱中加入700ul漂洗液PW,13000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱再次插上收集管.
7.向吸附柱中加入500ul漂洗液PW,13000rpm离心2分钟.将吸附柱置于室温或50℃温箱中数分钟,彻底晾干(若漂洗液有残留会影响回收效率和质量).
8.将吸附柱放到一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20ul 65-70℃预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟.13000rpm离心1分钟收集DNA溶液.
9.为提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新加回同一离心吸附柱中,重复以上步骤8.
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