高效液相色谱法测定人血浆盐酸硫必利浓度

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高效液相色谱法测定人血浆盐酸硫必利浓度李　萍１，刘　杰２，张媛媛３，闫　燕１（１．山东省青岛市食品药品监督管理局，２６６００１；２．山东省青岛市市立医院药剂科，２６６０１１；３．山东省青岛市药品检验所，２６６０７１）［摘　要］　目的　建立测定血浆硫必利浓度的高效液相色谱法。方法　用Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，乙腈０．０１ｍｏｌ·Ｌ１磷酸缓冲液（磷酸调ｐＨ值至３．０）＝１０９０为流动相，检测波长２１６ｎｍ，柱温５０℃，舒必利为内标。结果　血样标准曲线方程为Ａ１／Ａ２＝１．３４０１Ｃ＋５．９７５８，血浆相对回收率９９．８２％，绝对回收率８７．０１％，定量下限５．０ｎｇ·ｍＬ１。结论　该法简便、快速、准确性好。［关键词］　硫必利；色谱法，高效液相；血药浓度［中图分类号］　Ｒ９６９．５；Ｒ９７１．４　　　［文献标识码］　Ａ　　　［文章编号］　１００４０７８１（２００８）１１１３１２０２　　笔者在本实验中建立了快速、易行的测定血浆硫必利浓度的高效液相色谱法，适用于硫必利的临床药动学、药效学及药物相互作用研究［１～３］。１　仪器与试药　Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱系统（美国　Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；ＷＨ１微型旋涡混合器（上海沪西分析仪器厂）；ＴＧ１６Ⅱ离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）；盐酸硫必利（济南民康制药厂，批号：２００７０３２１）；舒必利（常州红太阳药业有限公司，批号：２００６１０１６）；乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心）；磷酸（分析纯，青岛通源化工有限公司）。２　方法与结果［４～６］　２．１　色谱条件　色谱柱：Ｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ１００Ｃ１８（５μｍ，２５０ｍｍ× ４．６ｍｍ）；流动相：乙腈０．０１ｍｏｌ·Ｌ１磷酸缓冲液（用磷酸调ｐＨ值至３．０）（１０９０）；检测波长：２１６ｎｍ；柱温　５０℃；流速：１ｍＬ·ｍｉｎ１；内标：舒必利（ＩＳ）。２．２　血浆样品的处理与分析　精密量取血浆样品５００μＬ置于１０ｍＬ具塞离心试管中，精密加入内标溶液１０μＬ，涡旋混合５ｓ，加入０．１ｍｏｌ·Ｌ１ＮａＯＨ１ｍＬ，涡旋混合５ｓ，再加入乙酸乙酯５．０ｍＬ，旋涡振荡５ｍｉｎ，４０００ｒ·ｍｉｎ１离心１０ｍｉｎ，转移有机相置于１０ｍＬ具塞玻璃试管中，血浆再次加入５ｍＬ乙酸乙酯涡旋，离心，合并乙酸乙酯层。向乙酸乙酯提取液中加入０．１ｍｏｌ·Ｌ１　盐酸１ｍＬ，涡旋　１５ｍｉｎ后，４０００ｒ·ｍｉｎ１离心１０ｍｉｎ，将水层转移至５ｍＬ具塞试管中。向水相提取液中加入５ｍｏｌ·Ｌ１　ＮａＯＨ０．３ｍＬ，混匀后，加入２ｍＬ乙酸乙酯，涡旋１０ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ，分离有机层，置于５ｍＬ具塞玻璃试管中，再加入２ｍＬ乙酸乙酯，涡旋，离心１０ｍｉｎ，合并乙酸乙酯层［７，８］。４０℃下氮气吹干乙酸乙酯，加入　０．１ｍＬ流动相复溶，进样２０μＬ，内标舒必利的保留时间约为１０ｍｉｎ，硫必利的保留时间约为１５ｍｉｎ。

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