前
本标准等效采用美国公职分析化学师协会 本系列标准从实施之日起 代替 本标准由中国轻工总会提出 本标准由全国乳品标准化中心归口
言
方法
本标准负责起草单位 国家乳制品质量监督检验中心 本标准参加起草单位 卫生部食品卫生监督检验所 浙江省轻工业研究所 哈尔滨森永乳品有限公 司 雀巢 中国 投资服务有限公司 本标准主要起草人 殷晓红 王芸 杨金宝 张玉杰
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉 叶酸 叶酸盐活性 的测定
代替
范围 本标准规定了用微生物法测定叶酸 叶酸盐活性 的方法 本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中叶酸 叶酸盐活性 的测定 方法原理 叶酸盐的活性通过干酪乳杆菌 试剂 菌种和培养基 所有试剂 如未注明规格 均指分析纯 所有实验用水 如未注明其他要求 均指三级水 鸡胰腺 称取 干燥的鸡胰腺 加 蒸馏水 搅拌 离心 清液用 现用现配 生理盐水 称 个培养管中 盖上盖 磷酸缓冲液 酸缓冲液中 现用现配 叶酸 标准品 浓氨水 甲苯 菌种 干酪乳杆菌 培养基 乳酸杆菌琼脂培养基 胨化乳 酵母浸膏 葡萄糖 番茄汁 磷酸二氢钾 聚 山梨糖单油酸酯 琼脂 加蒸馏水至 乳酸杆菌肉汤培养基 胨化乳 酵母浸膏 葡萄糖 番茄汁 磷酸二氢钾 聚 山梨糖单油酸酯 加蒸馏水至 叶酸测定用培养基 酪蛋白胨 葡萄糖 乙酸钠 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 色氨酸 天门冬氨酸 半胱氨酸盐酸盐 硫酸腺嘌呤 盐酸鸟嘌呤 尿嘧 啶 黄嘌呤 聚山梨糖 谷光甘肽 硫酸镁 氯化钠 硫酸亚铁 硫酸 锰 核黄素 氨基苯 甲酸 维生素 盐酸硫胺素 泛酸钙 烟酸 生物素 加蒸馏水至 氢氧化钠溶液 为 国家技术监督局 批准 实施 氯化钠 分析纯 于 容量瓶中 稀释至刻度 振荡溶解 灭菌 每周准备一次 为 含有抗坏血酸 溶解 抗坏血酸于 分装 的生长情况来评价
取上 到每 磷
仪器 常用实验室仪器及 培养箱 灭菌釜 培养管和帽 试管振荡架 接种针和接种环 计 离心机 制备 菌种的制备 将纯菌种植物乳杆菌 从菌种培养基上接种到三个转接培养基试管中 培养 每月接种一次 标好 贮于冰箱中 再以每月接种的培养管 的一支中再接种 支转接培 养基 培养 每周做一次这样的转接 每周从接种管中接种 支转接培养基接种管 培 标好 作为每日测定用 养 每月月初从月接种管中重新接种 个转接管保存新菌种 从日接种管中接种一管于菌种培养基中 培养 在无菌条件下离心该培养液 倾去上清液 再用 生理盐水 将细菌细胞清洗 再离心 倾 去上清液 再用另外的 生理盐水 清洗 如前面一样离心 弃去上清液 再加 生理盐水 吸 该菌悬液于 生理盐水 中 混合均匀 标准溶液的制备 标准贮备液 叶酸的浓度 精确称取 叶酸标准品 用 蒸馏水定量地转入 容量瓶中 加 氨水 溶液制备后 计算溶液的体积 要求贮备液中叶酸盐的浓度为 贮备液体积 或简化为 贮备液体积 标样的质量 标样的纯度 用蒸馏水稀释溶液至刻度 用吸管加蒸馏水到所要求的计算得到的体积 充分混合 放入红色或棕 色瓶子中 贮于冰箱 保存期为 个月 标准中间液 叶酸的浓度 精确吸取 标准贮备液 液于 棕色或红色容量瓶中 用蒸馏水稀至刻度 充分混 合 贮于冰箱中 保存期 个月 标准工作液 叶酸的浓度 吸取 标准中间液 于 棕色容量瓶中 用蒸馏水定容至刻度 混合 再吸该液 于 棕色容量瓶中 定容 混合 再从上液中吸 于 棕色容量瓶中 用 磷酸缓冲液定容到刻度 混合 即为标 准工作液 或 每次测定前制备 式中
操作步骤 测定溶液的制备 粉状样品 精确称取一定量的样品 样品中约含有 叶酸 于 烧杯中 用 容量瓶中 用蒸馏水定容至刻度 接 步骤继续 量地转入 液体样品 的叶酸于 容量瓶中 用水定容至刻度 接 吸取定量的样品 大约含 溶液中叶酸的质量浓度大约为 吸 合 加 稀释样品和 鸡胰腺 于一个 含抗坏血酸的磷酸缓冲液 再加 水复原样品 定
的带螺旋盖的培养试管中 充分混 甲苯 作一个空白对照管 吸 甲苯 磷酸缓冲液稀
蒸馏水和 鸡胰腺于空白管中 也加 于 培养样品管和空白管 再于 释 得到叶酸盐的质量浓度约为 标准曲线的制备 的溶液
缓冲液 及 灭菌 之后离心 用
按表 顺序加入蒸馏水 标准溶液和叶酸测定用培养基于培养管中 一式三份 表
试管号 蒸馏水 标准溶液 培养基 试管 中加低浓度标准溶液 中加高浓度标准溶液
测定液 按表 顺序加蒸馏水 样品溶液和叶酸测定用培养基于培养管内 一式三份 表
试管号 蒸馏水 样品 培养基
灭菌 直接灭菌所有的试管 制冷到培养温度或迅速放入循环水浴内 以使颜色形成最浅 保证加热和制 冷条件均匀 灭菌管数过多或距离太近 在灭菌锅中都可产生不良影响 灭菌 接种 无菌的接种每个管 均加入一滴适当的接种物 除标准管 以外 盖上盖 充分振荡混合所有 管 培养 在 之间选择一个恒定温度 培养 测定 酸度法 试管被任何外来微生物污染则测定无效 通过对每个试管的视觉检查进行反应的预测 未接种管是 清的 标准和样品中无其他菌生长 滴定

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