Application Note: CM0015
TSQ Quantum Access质谱仪检测兽禽肉中 十七种磺胺类药物残留
刘畅1,秦峰1,徐杨1,刘婷2, Charels. Yang2,王勇为2 1,上海市药检所,微生物中心,食品实验室 2,赛默飞世尔科技公司, 色谱质谱部
磺胺类药物作为广谱抗生素,被应用于治疗农场动物
按上述步骤制备空白样品提取液,取下层水相,过 0.22μm滤膜后,进样分析. 分析标样配置 用甲醇稀释磺胺标准物得到0.1mg/mL标准储备液,保 存于4℃,可使用两个月.用甲醇稀释标准储备液至 5μg/mL 和0.5μg/mL,作为标准工作溶液.量取少量标准
Key Words
TSQ Quantum Access 磺胺类抗生素 LC/ESI/MS/MS
的细菌性感染疾病.但由于磺胺类抗球虫药残留危害 极大,可引起人类的癌症,畸形,抗药性及某些中毒现 象.美国,欧盟等已明文规定禁止在食品工业中使用 该类药物.我国农业部第235号文件规定其在兽禽肉中 的最高残留限量(MRL)为100μg/kg.
本文建立了快速测定猪肉,鱼肉和蛋中的十七种磺 胺类化合物,以 13C6-磺胺甲恶唑为内标,定量下 限为2μg/kg,标准曲线范围为2-200μg/kg,回收率为 20%-40%.
工作溶液,用空白样品提取液分别定容至1mL, 配制得 到10,25,50,100,250,500和1000ng/mL基质混合标 准曲线,保存于4℃,可使用一个星期. Accela U-HPLC液相色谱条件
实验条件: 仪器与试剂 Accela U-HPLC 液相色谱仪系统,配有Accela 自动进样器 和Accela Pump.TSQ Quantum Access 三重四极杆串联质 谱仪(赛默飞世尔科技Thermo Fisher Scientific 公司), 配有ESI源.标准品磺胺,磺胺醋酰,磺胺嘧啶,磺胺 噻唑,磺胺吡啶,磺胺甲基嘧啶,磺胺二甲嘧啶,磺 胺甲噻二唑,磺胺甲氧哒嗪,磺胺-6-甲氧嘧啶,磺胺 氯哒嗪,磺胺邻二甲氧嘧啶,磺胺甲基异恶唑,磺胺 二甲异恶唑,磺胺间二甲氧嘧啶,磺胺苯吡唑,13C6磺胺甲恶唑,纯度高于95%.除有特殊说明外,所用 试剂至少为分析级,水为GB/T6682规定的一级水,甲 醇,异丙醇,正己烷,甲酸均为色谱纯.
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18 150×2.1mm, 3.5μm;梯度 洗脱和流速见表1,其中A:甲醇;B:0.1%甲酸,2mM 甲酸铵水溶液;柱温:25℃;进样量:10 μL.
样品制备 将猪肉,鸡肉和蛋,搅碎,混匀,精密称取5g,置于 50mL离心管中,加入100μL,1μg/mL 13C-磺胺甲恶唑,再加 入20g 无水硫酸钠和20mL乙腈(蛋液样品加25g无水硫 酸钠,且无水硫酸钠与乙腈均在临匀质前加入),匀 质2分钟,3000r/min离心3分钟,上清液倒入100mL 鸡心 瓶中,残渣再加入20mL乙腈,重复上述操作一次.合 并提取液,向鸡心瓶中加入10mL异丙醇,用旋转蒸发 器于30℃水浴蒸干,加入乙腈-0.01M乙酸铵(12:18) 1mL 和0.8mL正己烷,转移至2mL离心管中,12000r/min 离心5min, 吸取上层正己烷弃去,再加入0.8mL正己烷, 涡旋1min后,重复上述步骤,至下层水相变透明.
TSQ Quantum Access 质谱仪条件 电喷雾电离源(ESI),正离子模式;选择反应监控(SRM)扫描模式,喷雾电压:4000 V;离子传输管温度:350 ℃;氮气作为鞘气和辅助气,其中鞘气为35 arb, 辅助气为3 arb,氩气用作碰撞气, 碰撞压力为1.5 mTorr; 选择反应监测(SRM)离子对见表2,扫描宽度为0.002, 扫描时间为 0.010 ms.
本方法在猪肉,鱼肉和蛋中,磺胺醋酰,磺胺嘧啶, 磺胺噻唑,磺胺吡啶,磺胺甲基嘧啶,磺胺二甲嘧 啶,磺胺甲噻二唑,磺胺甲氧哒嗪,磺胺-6-甲氧嘧 啶,磺胺氯哒嗪,磺胺邻二甲氧嘧啶,磺胺甲基异恶 唑,磺胺二甲异恶唑,磺胺间二甲氧嘧啶,磺胺苯吡 唑的定量下限为2 μg/kg.图1为2μg/kg添加得到的典型 LC/MS/MS色谱图;图2为17种磺胺类化合物的标准曲 线(2-200μg/kg).
图1,17种磺胺类化合物和内标的2μg/kg添加到基质样品中的LC/MS/MS色谱图
本方法测定十七种磺胺类抗生素,在猪肉,鱼肉和蛋 中磺胺,磺胺氯哒嗪,磺胺甲基异恶唑和磺胺二甲 异恶唑的平均回收率均应在20%以上,其它化合物的 回收率应在40 %以上,均满足国内外的最低检出限要 求,并且定量定性准确,重现性好.

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