TD0232 与有关物质的液相色谱分析方法研究
学生:张燕青 指导老师:陈东英
目的 利用反相高效液相色谱法和薄层色谱法,建立新药 TD0232 与主要有关物 质 TD0232-10, TD0232 -11, TD0232-13 , TD0232-14 的分离条件; 建立 TD0232 与对映体 TD0231 的手性高效液相色谱分离条件.进一步考察 TD0232,TD0231 和已知相关物质的检测限测定及有关物质限度的检查.方法 1,建立反相 HPLC 法分离条件,分别进行了检测波长的选择,十八烷基硅烷(C18) ,辛烷基(C8) 和氰基柱等不同类型的色谱柱的选择,流动相类型的选择,缓冲盐体系的选择. 进一步对分离方法的选择性研究.通过人为的破坏样品,在高温(80℃) ,高湿 (92%) ,强光照(4500LX) ,强酸(HCl) ,强碱(NaOH) ,强氧化(30%H2O2) 条件下进行破坏试验,尽可能得到降解物,以考察分离条件的特异选择性.2, 以各种体系的有机溶剂为展开剂,在薄层色谱硅胶板 F254(Merck.10×20cm, 105℃活化 15min)上展开,比较斑点数量,形状,Rf 值等分离情况,选择合适 的展开剂体系.3,采用手性 HPLC 法,利用手性色谱柱 Chiralcel OD 对 TD0231 作检测限的测定及含量限度测定.结果 1,TD0232 及有关物质的分离在常会的 十八烷基硅烷(C18),流动相为甲醇:醋酸盐缓冲液(0.03mol/l,pH4.5) (80: 柱温为 40℃, 检测波长为 265nm 的反相 HPLC 条件下, 20) 流速为 1.00ml/min, , 得到比较满意的分离效果.该分离条件能够使样品与有关物质峰,样品与破坏所 得物质峰相对分离,2,采用薄层色谱法对样品及其有关物质进行分离,初步选 出了 2 种相对较好的分离体系,即甲苯:无水乙醇:二氯乙烷:三氯甲烷 (0.4:0.05:0.15:0.4)和苯:正丁醇:二氯甲烷:正己烷(0.3:0.1:0.25:0.35)体系. 3,TD0232 与 TD0231 在流动相为正己烷:乙醇(80:20) ,流速:1.5ml/min, 温度:30℃,检测波长:265nm 时,分离较好,TD0231 的最先检测限为 2.8× 10-4mg/ml,样品中异构体 TD0231 的含量均远小于 0.1%,并且在检测限以下. 结论 该反相 HPLC 法可以分离 TD0232 及有关物质,但主峰形不佳.其中,有 关物质的含量都小于 1%,而 TD0231 含量小于 0.1%.反相 HPLC 法和薄层色谱 法的分离条件有待进一步优化. 关键词:TD0232;高效液相色谱;薄层色谱;有关物质;手性药物