前
言
食品中葡萄糖的测定方法,一般采用《国际食糖分析方法统一委员会》规定的"兰━ 挨农法"(Lane and Eynon's Method)和"姆松━华尔格法"(Munson and Walker's Method),即菲林氏溶液氧化还原滴定法.此法虽沿用已久,但测定结果只是近似值.因使用 菲林氏溶液滴定葡萄糖(还原糖)时,其他具有还原能力的单糖会干扰测定结果.本标准采 用的酶━比色法和酶━电极法是在检索了近 20 年 107 篇国外文献的基础上, 经过反复实验, 验证而制定的.酶━比色法和酶━电极法使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有专一性,只能催 化葡萄糖水溶液中的β—D—葡萄糖起反应(被氧化),因此测定结果是真实值.本标准的 酶━比色法为仲裁法;酶━电极法为快速法. 本标准的附录 A,附录 B 都是标准的附录. 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口. 本标准起草单位:中国农垦北方食品监测中心(酶━比色法);山东省科学院生物研究 所(酶━电极法). 本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审校. 本标准主要起草人:张宗城,刘宁,冯德荣,孙士青,宋家华,郝煜. 目 次
前言 1 范围 ………………………………………………………………………………………… x 2 酶━━比色法 ……………………………………………………………………………… x 3 酶━━电极法 ……………………………………………………………………………… x 附录 A(标准的附录) ………………………………………………………………………… x 附录 B(标准的附录) ………………………………………………………………………… x 中华人民共和国国家标准 食品中葡萄糖的测定方法 酶-比色法 酶-电极法 GB/T 16285-96
Method for determination of glucose in food Enzyme-Colorimetric method Enzyme-Electrode method ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1 范围 本标准规定了用酶━比色法和酶━电极法测定食品中葡萄糖的方法,适用于各类食品 中葡萄糖的测定;亦适用于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定. 本标准酶━比色法的最低检出限量为 0.01μg(葡萄糖)/mL(试液);酶━电极法的最 低检出限量为 1.0mg/100mL. 2 酶━比色法 2.1 原理 葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下,催化β—D—葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化,生 成 D—葡萄糖酸—δ—内酯和过氧化氢.受过氧化物酶(POD)催化,过氧化氢与 4—氨基安 替比林和苯酚生成红色醌亚胺.在波长 505nm 处测定醌亚胺的吸光度,计算食品中葡萄糖
的含量. GOD C6H12O6+O2——→C6H10O6+H2O2 POD H2O2+C6H5OH+C11H13N3O——→C6H5NO+H2O 2.2 试剂 2.2.1 组合试剂盒 1 号瓶:内含 0.2mol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0)100mL,其中 4—氨基安替比林为 0.00154mol/L; 2 号瓶:内含 0.022mol/L 苯酚溶液 100mL; 3 号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)400U(活力单位),过氧化物酶(辣根, peroxidase)1000U(活力单位). 1,2,3 号瓶须在 4℃左右保存. 2.2.2 酶试剂溶液: 1 号瓶和 2 号瓶的物质充分混合均匀, 将 再将 3 号瓶的物质溶解其中, 轻轻摇动(勿剧烈摇动), 使葡萄糖氧化酶和过氧化物酶完全溶解. 此溶液须在 4℃左右保存, 有效期 1 个月. 2.2.3 0.085mol/L 亚铁氰化钾溶液:称取 3.7g 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)63H2O,GB1273, 分析纯] 溶于 100mL 重蒸馏水中,摇匀. 2.2.4 0.25mol/L 硫酸锌溶液:称取 7.7g 硫酸锌( ZnSO47H2O,GB666,分析纯),溶 于 100mL 重蒸馏水中,摇匀. 2.2.5 0.1mol/L 氢氧化钠溶液:称取 4g 氢氧化钠(GB629,分析纯),溶于 1000mL 重蒸馏 水 中,摇匀. 2.2.6 葡萄糖标准溶液:称取经 100±2℃烘烤 2h 的葡萄糖(HG 3 — 1094,分析纯 ) 1.0000g, 溶于重蒸馏水中,定容至 100mL,摇匀.将此溶液用重蒸馏水稀释 V2.00 —→ V100,即为 200μg/ mL 葡萄糖标准溶液. 2.3 仪器和设备 实验室常规仪器及下列各项: 2.3.1 研钵或粉碎机. 2.3.2 分析筛. 2.3.3 组织捣碎机. 2.3.4 恒温水浴锅. 2.3.5 可见光分光光度计. 2.3.6 微量移液管:1.00mL,精度 0.01mL. 2.4 试样的制备 2.4.1 固体样品 粉末状样品: 取有代表性的样品至少 200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内. 颗粒状样品:取有代表性的样品至少 200g,用粉碎机粉碎,或用研钵研细,通过 100 目分析筛,置于密闭的玻璃容器内. 新鲜水果,蔬菜等固体样品:取有代表性的可食部分至少 200g,用组织捣碎机捣碎, 置于密闭的玻璃容器内. 2.4.2 糊状样品 取有代表性的样品至少 200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内.

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