1.4.2.还原糖:采用3,5-二硝基水杨酸法[5]. 1.4.3. 氨基酸含量:采用生物传感器SBA-40C型测定[6]. 2.结果与讨论 2.1 L-谷氨酸发酵过程分析 图1 L-谷氨酸发酵过程曲线 Fig.1 Time course of L-glutamic acid production 在50m3发酵罐上进行补料分批发酵,每隔2h左右进行各项 参数的测定,结果如图1所示. 由图1可知,L-谷氨酸发酵大体可分为三个阶段,前8h主芦为菌体生长阶段,菌体快速增殖;8-28h为产物的主要吊成阶段,比产酸速率为6g/L左右;28h后菌体浓度略有下銙,增酸速度放慢,比产酸速率为1-2g/L左右,但耗糖速犎仍较快,造成这一阶段的糖酸转化率较低. 2.2补糖方式对L-谷氨酸后期产酸的影响 葡萄糖的流加方式对谷氨酸发酵的后期产酸有很大影响 ,在流加培养过程中可以根据微生物细胞的需要补充葡 萄糖等营养成分并控制适宜的浓度,从而显著提高营养 物及能量代谢的利用率,减少甚至消除副产物的生成和 积累,有效解决营养物质耗竭和代谢副产物积累的矛盾 ,提高细胞培养的经济性[7].残糖浓度维持在较低水平 时菌体可在短时间内同化发酵液中的残糖而处于饥饿状 态,因而要求补料系统能够迅速补入菌体消耗的糖分. 根据L-谷氨酸实际发酵过程的特点,按照反馈参数和流刽方式的不同,考察恒速流加,恒残糖流加,溶氧控制犚脉冲流加等流加方式对L-谷氨酸发酵的影响,结果如囊2,图3所示. 图2 补糖方式对菌体生长的影响 Fig.2 Effect of feed methods on cell growth 图3 补糖方式对L-谷氨酸产量的影响 Fig.3 Effect of feed methods on L-glutamic acid production 恒速流加即补料液在整个发酵过程中一直保持恒定流速 不变,此种补料方式葡萄糖在发酵前期和稳定期后期相 对过量,在主产酸期不足,受葡萄糖浓度的影响,发酵 前期菌体生长较快,活力衰退较快,产酸水平不高. 恒残糖流加是根据上一时间间隔的耗糖量预测下一时刻 的耗糖量,从而将流速调至合适值,保持糖浓度的恒定 .但由于在线测量的不易实现,葡萄糖浓度需离线测量 ,只能预测补糖,补入的糖量可能不合适,菌体生长和 产酸并不能像预测一样稳定,整个发酵过程菌体生长较 慢,但产酸高于恒速补料. r \ p '

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