实验十 保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
一,实验原理
根据GB/T5009.171-2003,将25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位.在碱性条件下,邻苯三酚会发生自氧化,可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力.
二,实验试剂
A液:pH 8.20的0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(内含1mmol/L
EDTA·2Na).称取1.2114g三羟甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/l盐酸溶液中,用蒸馏水定溶至100ml.
B液:4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液.称取邻苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液,并定容至100ml.
盐酸溶液:10mmol/L 蒸馏水:二重石英蒸馏水
三,实验仪器
紫外-可见分光光度计 精密酸度计(0.01pH) 离心机 10ml比色管 10ml离心管 玻璃乳钵.
四,测定步骤
⑴取茶叶样品1.00g置于研钵中,加入9.0ml蒸馏水研磨5分钟,移入10ml离心管.用少量蒸馏水冲洗研钵,洗液并入离心管中,加蒸馏水至刻度,经4000r/min离心15分钟,取上清液测定.
⑵在25℃左右,于10ml比色管中依次加入A液2.35ml,蒸馏水2.00ml,B液0.15ml.加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1Min后吸光度值,二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325(min-1)为0.060.
⑶在25℃左右,于10ml比色管中依次加入20.0ul样液或酶液,A液2.35ml,蒸馏水2.00ml,B液0.15ml.加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1分钟后吸光度值,二者之差为样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率△A′325(min-1).加入样液或酶液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2△A′325(min-1),即0.030.
五,计算
式中:
V—加入样液或酶液的体积,ml
△A325—邻苯三酚自氧化速率
△A′325—样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率
D—样液或酶液的稀释倍数
V1—样液总体积,ml
4.5—反应液总体积,ml
m—样液的质量,ml